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发布日期:2022-5-31 17:37:00

BCA 法蛋白含量测定试剂盒说明书

(微板法 96 )

一、产品简介:

BCA 蛋白含量试剂盒提供一种简单,快速,耐去污剂(最多 5%) 的检测蛋白质浓度 的方法。由于蛋白质能将 Cu2+还原成 Cu+BCA 可与 Cu+结合生成紫蓝色复合物,在 562nm 处有最大光吸光值,颜色的深浅与蛋白含量成正比,因此可根据吸光值测定蛋白质浓度。

二、试剂盒组分与配制:

 

试剂名称

规格

保存要求

备注

试剂 A

液体 25mL×1 

4℃保存

依据实验用量,临用前试剂   A:B=50:1 的比例混匀成反应 mix

试剂 B

液体 0.5mL×1 

4℃保存

标准品

液体 1.5mL×1 

4℃保存

若重新做标曲,则用到该试剂

三、所需的仪器和用品:

酶标仪、96 孔板、台式离心机、恒温水浴锅、移液器和蒸馏水。

四、蛋白含量测定:

建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验 样本和试剂浪费!

1、样本制备:

1)组织样本:

称取约 0. 1g 组织,加入 1mL 提取液(提取液可选用酶提取缓冲液、蒸馏水、生理盐水) 冰浴匀浆,12000rpm 4℃离心 10min ,取上清,即待测液。

【注】: 依据研究经验,一般需将样本粗提液稀释到适当倍数再进行测定,如 10 倍。实 验前可以先选 2 个样本测定,摸索确定适合本次实验的稀释倍数。

2)细菌或细胞样本:

先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;  500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液; 超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W ,超声 3s ,间隔 10s ,重复 30 ), 12000rpm 4℃离心 10min ,取上清,即待测液。

【注】: 依据研究经验,一般需将样本粗提液稀释到适当倍数再进行测定,如 10 倍。实

验前可以先选 2 个样本测定,摸索确定适合本次实验的稀释倍数。

3)液体样本: 澄清无色液体样品可以直接测定。若浑浊,离心后取上清检测。

2 、上机检测

1)酶标仪预热 30min ,调节波长到 562 nm

2反应 mix 置于 60℃水浴预热 30 min 仅煮一次即可)。

 

试剂名称(μL

测定管

空白管(只做一次)

样本

5

 

蒸馏水

 

5

反应 mix

200

200

混匀,于 60℃保温 30min ,全部转移到 96 孔板,  562nm 处测定吸光值 A A= A 测定-A 空白。

【注】: A  1.5 ,需将样本用提取液稀释后再测定。

 

本试剂盒仅供科研使用

 

五、结果计算:

1 、标准曲线方程: y = 0. 188x - 0.0046x 是标准品质量(μg),y A

 

 

 

2、Cpr (mg/g  鲜重)= [(A+0.0046)÷0. 188×10-3]÷(V1÷V×W) ×D =1.06×(A+0.0046) ÷W×D

 

3 Cpr (mg/mL)=[ (A+0.0046)÷0. 188×10-3]÷V1×D=1.06×(A+0.0046)×D

 

4 Cpr (μg/104 cell))=[ (A+0.0006)÷0.0687]÷(V1÷V×500)×D=2. 13×(A+0.0006)×D

 

 

 

V----提取液体积: 1mL

V1----加入粗提液体积: 0.005mL

W----样本质量: g

D----稀释倍数;

500---细菌或细胞总数,500 万。

 

附: 标准曲线制作过程:

1     标准品母液(500μg/mL)。

2     把母液稀释成以下浓度梯度的标准品: 0, 100, 200, 300, 400, 500. μg/mL。也可根据实 际样本来调整标准品浓度。

3     依据测定管加样表操作,根据结果即可制作标准曲线。

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